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樣品去鹽技術(shù)

在免疫酶技術(shù)中，抗原、抗體、酶及酶標(biāo)記抗體（或抗原）在分離與純化過程中，常常會碰到去鹽這一實驗環(huán)節(jié)。經(jīng)過去鹽，蛋白質(zhì)溶液中不必要的無機鹽分子得以去除，從而使蛋白進(jìn)一步純化與穩(wěn)定。常用的去鹽技術(shù)如下：

1．透析

適用于體積不太大的蛋白質(zhì)溶液，簡單方便，效果理想但費時。

2.凝膠過濾

適用于體積中等的蛋白質(zhì)溶液，簡便快速，效果理想，但去鹽后的蛋白質(zhì)溶液體積增大較多。

3.超濾

適用于體積較大的蛋白質(zhì)溶液，去鹽速度快，同時具有濃縮作用，但由于膜吸附作用，樣品丟失較多。

4.透析

實驗室常用的去鹽方法是透析法。

在透析法中所使用的透析袋，是一種斗透膜。半透膜具有使小分子或離子透過，而蛋白質(zhì)分子不能通過的特性。將蛋白質(zhì)溶液裝入透析袋內(nèi)，浸泡于蒸餾水中，由于膜內(nèi)外可擴(kuò)散離子濃度的差別，使蛋白質(zhì)溶液中的無機鹽分子向膜外蒸餾水中擴(kuò)散。如果經(jīng)常更換蒸餾水，則可將蛋白質(zhì)溶液中的鹽類分子全部除去，這就是半透膜的去鹽透析原理。假若膜外不是蒸餾水而是緩沖液，可以經(jīng)過膜內(nèi)外離子的相互擴(kuò)散，改變蛋白質(zhì)溶液的無機鹽成分，這就是半透膜的平衡透析原理。在離子交換層析前經(jīng)常進(jìn)行平衡透析處理。

半透膜透析去鹽過程如下：

（1）               依據(jù)樣品量的多少，剪取一段半透膜，浸在蒸餾水中一段時間，然后再用蒸餾水沖洗。

（2）               使用時，將半透膜一端折疊，封閉使之成底端，并用滴管加入蒸餾水檢查是否漏水。

（3）               在1000－2000ml大燒杯中注滿水，燒杯口上擱置一玻棒。

（4）               倒盡膜內(nèi)蒸餾水，然后加入蛋白質(zhì)樣品液（不能裝得太滿，以免脹裂），用橡皮筋扎牢管的上端，懸掛在玻璃棒中央，放入蒸餾水燒杯中。

（5）               將蒸餾水燒杯置于4℃冰箱中透析2－3天，每天換水3次以上。如果置于磁力攪拌器上攪拌透析，則去鹽效果更好。要經(jīng)常檢查透析袋的扎口是否緊密，以防漏液。

（6）               按不同樣品要求去除不同無機鹽離子，可用特定的指示劑測定zui后透析用過的蒸餾水中是否還含有這種離子。

5．討論

（1）蛋白質(zhì)樣品的濃度應(yīng)透析后測定，因為經(jīng)過半透膜透析，膜內(nèi)滲透壓高于膜外，水分子會進(jìn)入膜內(nèi)，所以在去鹽以后，蛋白質(zhì)溶液體積會相應(yīng)增大。

（2）有時會在透析袋內(nèi)發(fā)生沉淀，一般而言，通過離心去除并不影響蛋白質(zhì)樣品的性質(zhì)。

 （3）透析袋在生理鹽水中浸洗后，還可繼續(xù)使用。